Doxrubicin を使って AAV vector による遺伝子発現を早める
original paper
doxorubicin
Antic-caner drug doxrubicin doubles the AAV mediated transgene expression
Doxrubivin enhancement generalaize across AAV serotypes (AAV8, 1, 5, retro) and animal species (cat, mouse, monkey)
Lacking of cytotoxity
protocol
蒸留水で溶かす(1mg/mL)−80度で保存.(Chen は 100 uL で分注).かなりオレンジ色.
酸性度高いので,いきなり PBS だと解けない.生食で溶かす.
個人使用用に,10 uL ごとに分注して −80度で keep.←どのくらい持つ??
使用時,1 uL とって,Saline もしくは Brain Buffer で,10 倍希釈(100 ug/mL).
さらに そこから,1 × 10^12 gc/mLの AAV 液で 10 倍(最終 10 ug/mL = 100 倍希釈)にして使用.
AAV1-hSyn-somaGCaMP6f2 の場合 (8 × 10^13 gc/mL)
Brain buffer で 8 倍に希釈
さらに Brain buffer で 10 倍に希釈 (10^12 gc/mL , (2022/02/07))
例えば,20uL の AAV 溶液に 2 uL の 10倍希釈 Doxorubicin 溶液を混ぜる.
1st trials, 2/7
1. AAV1-hSyn-somaGCaMP6f2@V1
2. AAV-rg-CAG-tdTomato@SC
1st resuts, 2/16
1. AAV1-hSyn-somaGCaMP@V1
9日目でかなり明るい.発現が強すぎるさ細胞もパラパラいる.
Doxorubicin の濃度を下げる (例えば半分の 5 ug/
2nd trials, 2/18: VGAT-Cre(1220)
1. AAV1-hSyn-somaGCaMP (1*10^12vg/mL) + AAV9-hSyn-DIO-hM4Di-mCherry (1*10^12vgmL) + Rubicine (x200) @SC
2. 発現弱いかも.SC でも x100 でやった方が良さそう.
Date :2022/2/8
Modified Date :2022/3/14
Author :lattice.icon