TEER measurement

Aim

経上皮電気抵抗（TEER）を測定し、上皮細胞シートのバリア機能を評価する。

Material

トランズウェル

24 well plate

Millicell ESR 3.0 (TEER測定装置)

Methods

細胞の用意

消毒したピンセットでトランズウェルを24 well plateに写しておく。

細胞を通常通りはがし、細胞数を測定。

適当な細胞数の懸濁液を作製する。（北島の場合、4.35x10^5 cells/mLで作製）

プレートのウェルに900 uLの培地を加え、そこにセットしたトランズウェル内に細胞懸濁液200 uLを加える。ブランクのウェルには培地のみを200 uL入れる。（少なくとも同条件のウェルを2つ用意する）

培地の蒸発を防ぐために、ウェルの間にDDWを適量入れておく。

TEERの測定

電極プローブを70%エタノールに浸し、15分静置して滅菌する。（電極の根元までは浸さないように）

滅菌後、電極プローブを風乾で乾燥させる。

本体を起動し、検証アダプターを挿入する。

ホーム画面の設定を開き、"Check Verification"を押す。測定値が5000Ω±5, 25℃±1になっていることを確認（この確認は使用時に毎回行う）。

検証アダプターを電極プローブに挿し替えて測定。

測定後、電極プローブをエタノール脱脂綿でふき、DDWでwashする。キムワイプで軽く拭いて風乾させた後に片付ける。

データの取り出し

本体にUSBを挿して、出力したいプレートを選択。"Export"する。（フォーマットのエラーが出たら他のUSBを試す、どれかはうまくいく）

Remarks

培地交換は1日おき（2日に1回）に行う。

測定するときはプレートを常温に戻さなくてもいい。常温にすると値は安定するが、細胞へのダメージが大きいため。

ウェル間で電極は洗浄しなくてもいい。気になる場合は培地で洗浄する。

Aim

To measure transepithelial electrical resistance (TEER) and evaluate the barrier function of epithelial cell sheets.

Materials

Transwell inserts

24-well plate

Millicell ESR 3.0 TEER meter

Methods

Preparation of Cells

Using sterilized forceps, transfer the Transwell inserts into a 24-well plate.

Detach the cells using the standard procedure and count the number of cells.

Prepare a cell suspension at an appropriate concentration.（In Kitajima’s case, the cell suspension is prepared at 4.35 × 10⁵ cells/mL）

Add 900 µL of culture medium to each well of the plate. Then, add 200 µL of the cell suspension into each Transwell insert placed in the well.

For blank wells, add 200 µL of culture medium only to the Transwell inserts.（Prepare at least two wells for each condition）

To prevent evaporation of the medium, add an appropriate amount of DDW between the wells.

TEER Measurement

Immerse the electrode probe in 70% ethanol and leave it for 15 min for sterilization.（Be careful not to immerse the base of the electrode）

After sterilization, air-dry the electrode probe.

Turn on the main unit and insert the verification adapter.

Open the settings on the home screen and press “Check Verification.”Confirm that the measured values are 5000 Ω ± 5 and 25°C ± 1.（This verification should be performed every time the device is used）

Replace the verification adapter with the electrode probe and perform the measurement.

After measurement, wipe the electrode probe with ethanol-soaked cotton and wash it with DDW.

Gently wipe the probe with a Kimwipe, allow it to air-dry, and then store it properly.

Data Export

Insert a USB flash drive into the main unit.

Select the plate data to be exported and press “Export.”（If a format error occurs, try using another USB flash drive. One of them should work）

Remarks

Replace the medium every other day.

The plate does not need to be equilibrated to room temperature before measurement. Although the TEER values become more stable at room temperature, leaving the cells at room temperature may cause greater damage to the cells.

It is not necessary to wash the electrode between wells. If needed, rinse the electrode with culture medium between measurements.