Oligo DNA phosphorylation
#2_Molecular
Aim
Oligo DNAをアニーリングするときに、vector側をBAP処理すると、Oligoをリン酸化する必要あり
Materials
T4 Polynucleotide kinase (Takara)
10x Polynucleotide kinase Buffer
100 mM ATP
Methods
まずは、アニーリング Oligo DNA annealing and ligation
Phosphorylation
Mixture
50 uM Double strand annealed Oligo DNA 2 ul
T4 Polynucleotide kinase (Takara) 1 ul
10x Polynucleotide kinase Buffer 2 ul
100 mM ATP 0.2 ul
DDW 14.8 ul
total 20 ul
Reaction
37℃ 30 min, 65℃ 15 min, hold 8℃
Dilution
1:50 dilution (e.g DDW 98 uL, phosphorylated dsOligo DNA 2 uL)
Ligation
Remarks
Date : 2018-06-17
Modified Date :
Author : y-goto.icon