線虫の胚発生の観察方法
Aim
線虫の胚発生を観察する(受精後からハッチするまで)
これが見たい!
https://www.youtube.com/watch?v=M2ApXHhYbaw&ab_channel=Hymanlab
Materials
Adult線虫(産卵を始めて2日ぐらいの成虫が最も卵が取れるらしい)
実体顕微鏡
ホールスライドガラス(底がへこんでいるスライドガラス)or 普通のスライドガラスでも可
小さいハサミ or メス刃(25-27G) or Injectionの針
ピッカー
Egg Salts
118 mM NaCl; 48 mM KCl in distilled H2O
Autoclave.
This salt mixture is preferable to M9 for cutting worms or for NaOCl dilutions, as it is more physiologically isotonic than M9 for embryos.
35 mm glassbottom dish
Methods
ホールスライドガラスにEgg Saltsを2-3 uLぐらいのせる
そこに線虫を2-3匹入れる(もっと多いほうがよい?)
実体顕微鏡下で線虫を真ん中で切る
子宮は二つあるので、切れていない方をもう一回切ると収量が増すらしい
卵が出ない時は切ったあとに線虫を押すと出てくるらしい
乾燥しないように手早く行う。乾燥しそうなら一滴ずつ追加する
線虫の死骸をピッカーなどでよける
チップで吸いやすいようにEgg Saltsを何滴か足す
glass bottom dishのガラス部分にEgg Saltsを満たす
イエローチップで卵を吸って、35 mm glass bottomの真ん中に静かに置く
卵が散乱しないようにゆっくりEgg Saltsを足して、ある程度ガラス部分を覆う
IX83弐号機で観察
x60 oil or x40 dry
観察範囲を狭くする
DIC なるべく光量を下げる
interval 5 sec, total 14 hrs?
*これだけ早めに撮るとBusyなので、撮影中Metamorphはいじらない。落ちます。
Remarks
agar padを使用する方法はこちらを参考に。
一回やってみたが発生が桑実胚ぐらいで止まってしまった。
動画
プロトコール
Date : 20231018
Modified Date :
Author : Ebine