ウエスタンブロッティングのサンプル調整
※ 細胞を溶解するには他の試薬も存在する。自身の実験にあった方法で調製すること。
1x Sample Bufferを用いたサンプル調製
準備
細胞 ※ポジコン・ネガコンもちゃんと準備しておくこと
1x Sample Buffer (300uL~400uL/well in 6well)
手順
培地を吸い、PBSで洗う
細胞にSample Bufferを入れる
ピペッティングでよく混ぜたらチューブに移す
超音波破砕機で液がサラサラになるまで破砕する (e.g. BioraptorでOn: 30sec, Off: 30sec, Power: high, 5 cyclesくらい)
95℃のヒートブロックで5分間煮る
1% NP40を用いたサンプル調製
準備
細胞 ※ポジコン・ネガコンもちゃんと準備ししておくこと
1% NP40(300uL/well in 6well)
2x Sample Buffer
手順
培地を吸い、PBSで洗う
細胞にNP40を300uL入れる
ピペッティングでよく混ぜたらチューブに移す(泡立てないように)
10秒間ボルテックス
4℃, 130rpm, 5minで遠心(細胞の塊が沈殿する)
250uLほど上清を別のチューブに移す
1xになるように2x Sample Bufferを同量入れる
Date : 2018.8.27
Modified Date :
Author :gmaryu.icon